1.液体培养基保存法

辽宁白酒老师傅建议将简化巴氏合成培养基灭菌后，接种，在35℃培养7天。当培养液浑浊度**，气泡上升也较多时，用石蜡封口，在℃冰箱中保存。

2·窖泥管保存法

取酒厂老窖的窖底泥装人试管灭菌后，接人黑轻80#己酸菌液，抽真空后封口。另一种方法是将窖泥干燥后，抽真空封口。

3·安瓿瓶保存法

将在简化巴氏合成培养基培养好的己酸菌，在无菌室中将上清发酵液倒去，然后在无菌操作条件下将 CaC03沉淀泥分装人安瓿瓶中，冷冻干燥后封口保存。

（五）培养方法

自20世纪70年代中期起，各地在生产性培养己酸菌方面做了大量工作，培养规模依各厂实际情况，从50L一10t以上不等。己酸发酵设备有简易的陶缸，也有用不锈钢罐的。产酸量基本稳定。

1.大罐培养

(1)50mL三角瓶培养种子罐以前的培养基成分，除酒精外，都采用化学纯的试剂。培养基配方见表一7，每一级的培养基应接近于装满容器。

将1支安瓿管菌种或干燥碳酸钙粉末菌种接人50mL三角瓶培养基中，保温30℃培养7、10天。待瓶底有小气泡上升、产气较旺盛时即可转接。这一级的培养是由长期处于休眠状态的芽孢开始生长繁殖，所以培养时间较长。

（2）500mL三角瓶培养每瓶装450mL培养基，接人已摇匀的50皿 L三角瓶培养液混匀后，保温30一32℃培养2一3天，培养液浑浊度增大，产气旺盛；镜检时可见长链状菌体断裂成一定数量的单独或双链的短杆菌，且移动性能良好，菌体粗壮、整齐。

（3）5L大三角瓶培养每瓶装培养基巧00。 L，接人上述一瓶500。 L培养液。培养过程及培养液质量要求同500mL三角瓶。

(4)50L种了罐培养培养基配方同前，但所有原料都为工业用级别，其中醋酸钠应按其纯度加至规定的含量。可用0口％酵母粉代替酵母膏，先溶于10倍量的水中，保温50一55℃，18一24h，制成自溶液后冉用。

    除乙醇外，先用总用水量巧％的水将各种成分溶化混合后，倾人种子罐中，并以直接蒸汽煮沸。再加人其余的水，使品温调整为30一32℃，然后加人酒精。接人一个大三角瓶的种子液，保温30一32℃，培养2、3天。待菌液质量达到如大一角瓶种子的要求时，即可转接至大罐发酵

（5）大罐发酵培养基配方及制备操作同种子罐。接种量为10％，保温30、32℃，培养约6天，培养液的己酸含量可达0·5％以上。培养发酵过程的菌体及发酵液变化。